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紫外分光光度計(jì)常見問題
更新時(shí)間:2009-09-26   點(diǎn)擊次數(shù):5178次

 

 

一、儀器的校正和檢定
由于溫度變化對機(jī)械部分的影響,儀器的波長經(jīng)常會略有變動,因此除應(yīng)定期對所用的儀器進(jìn)行全面校正檢定外,還應(yīng)于測定前校正測定波長。
常用汞燈中的較強(qiáng)譜線237.83、253.65、275.28、296.73313.16、334.15、365.02、404.66435.83、546.07576.96nm;或用儀器中氘燈的486.02656.10nm譜線進(jìn)行校正;
鈥玻璃在279.4、287.5、333.7360.9、418.5、460.0、484.5、536.2637.5nm波長處有尖銳吸收峰,也可作波長校正用,但因來源不同會有微小的差別,使用時(shí)應(yīng)注意。
吸收度的準(zhǔn)確度可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。取在120干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀約60mg,精密稱定,用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml,按下表規(guī)定的波長處測定并計(jì)算其吸收系數(shù)。規(guī)定的吸收系數(shù)如下表,相對偏差可在±1%以內(nèi)。

波長(nm
235(zui?。?/span>
257(zui大)
313(zui?。?/span>
350(zui大)
吸收系數(shù)E1% 1cm
124.5
144.0
48.62
106.6

 
雜散光的檢查可按下表的試劑和濃度,配制成水溶液,置1cm石英吸收池中,在下表規(guī)定的波長處測定透光率,應(yīng)符合表中的規(guī)定。

試劑
濃度%g/ml
測定用波長(nm
透光率(%
碘化納
1.00
220
0.8
亞硝酸鈉
5.00
380
0.8

 
二、對溶劑的要求
測定供試品前,應(yīng)先檢查所用的溶劑在供試品所用的波長附近是否符合要求;即用1cm石英吸收池盛溶劑,以空氣為空白(即空白光路中不置任何物質(zhì))測定其吸收度,溶劑和吸收池的吸收度,在220240nm范圍內(nèi)不得超過0.40;在241250nm范圍內(nèi)不得超過0.20;在251300nm范圍內(nèi)不得超過0.10,在300nm以上時(shí)不得超過0.05。
三、測定法
測定時(shí),除另有規(guī)定外,應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照,采用1cm的石英吸收池,在規(guī)定的吸收峰波長±2nm以內(nèi)測試幾個(gè)點(diǎn)的吸收度,以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確,除另有規(guī)定外,吸收峰波長應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長±2nm以內(nèi);否則應(yīng)考慮該試樣的真?zhèn)?、純度以及儀器波長的準(zhǔn)確度,并以吸收度zui大的波長作為測定波長。一般供試品溶液的吸收度讀數(shù),以在0.30.7之間的誤差較小。儀器的狹縫波帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度,否則測得的吸收度會偏低;狹縫寬度的選擇,應(yīng)以減小狹縫寬度時(shí)供試品的吸收度不再增加為準(zhǔn),由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收,因此測定供試品的吸收度后應(yīng)減去空白讀數(shù),再計(jì)算含量。
用作鑒別和檢查項(xiàng)目的方法,分別按各品種項(xiàng)下的方法進(jìn)行。鑒別項(xiàng)下吸收度讀數(shù)的范圍可根據(jù)配制供試液時(shí)的準(zhǔn)確度及制劑的實(shí)際含量確定。
用于含量測定的方法一般有以下幾種。
1對照品比較法
  按各品種項(xiàng)下的方法,分別配制供試品溶液和對照品溶液,對照品溶液中所含被測成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測成分標(biāo)示量的100±10%,所用溶劑也應(yīng)*一致,在規(guī)定的波長測定供試品溶液和對照品溶液的吸收度后,按下式計(jì)算供試品中被測溶液的濃度:
Cx=(Ax/ArCr
式中
Cx為供試品溶液的濃度;
  Ax為供試品溶液的吸收度;
  Cr為對照品溶液的濃度;
  Ar為對照品溶液的吸收度。
2吸收系數(shù)法
按各品種項(xiàng)下的方法配制供試品溶液,在規(guī)定的波長處測定其吸收度,再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計(jì)算含量。用本法測定時(shí),應(yīng)注意儀器的校正和檢定。
3計(jì)算分光光度法
采用計(jì)算分光光度法應(yīng)慎重。本法有多種,使用時(shí)均應(yīng)按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行。當(dāng)吸收度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測定時(shí),影響精度的因素較多,故對照品和供試品測試條件應(yīng)盡可能一致。若測定時(shí)不用對照品,如維生素A測定法,則應(yīng)在測定時(shí)對儀器作仔細(xì)的校正和檢定。

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